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Hématologie-oncologie

Diminution de l’activité sérique Opsonique contre Streptococcus pneumoniae chez les adultes ougandais infectés par le virus de l’immunodéficience humaine

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Les immunoglobulines G de type spécifique au polysaccharide capsulaire pneumococcique CPS et l’activité opsonique contre Streptococcus pneumoniae ont été évaluées dans des échantillons sériques d’adultes ougandais atteints de pneumonie communautaire et d’adultes ougandais asymptomatiques avec ou sans infection par le virus de l’immunodéficience humaine (VIH). Les échantillons sériques provenant de sujets infectés par le VIH et dont les titres en IgG étaient plus faibles présentaient une activité opsonique plus élevée contre les titres de type et les titres de type des souches pneumococciques. La charge plasmatique du VIH était également corrélée. inversement avec l ‘activité opsonique sérique contre ces souches, et les nombres de lymphocytes CD sanguins périphériques tendaient également à être corrélés avec l’ activité opsonique sérique chez les adultes asymptomatiques infectés par le VIH. Nos résultats suggèrent que l ‘activité opsonique de l’ IgG spécifique est altérée. Adultes africains infectés, qui peuvent les exposer à un ser risque infectieux d’infections pneumococciques invasives

Plus des deux tiers des millions de personnes vivant avec le VIH dans le monde résident en Afrique subsaharienne Streptococcus pneumoniae provoque des infections invasives chez les sujets infectés par le VIH dans cette région En outre, nous avons, ainsi que d’autres chercheurs, documentent que S pneumoniae est le pathogène le plus commun causant la pneumonie acquise dans la communauté chez les adultes ougandais et kenyans vivant avec le VIH Une activation et un dysfonctionnement importants des lymphocytes B associés à l’infection par le VIH peuvent prédisposer ces personnes aux infections pneumococciques invasives [- La défense de l’hôte contre la pneumonie pneumococcique dépend en grande partie des macrophages alvéolaires et de l’opsonisation des IgG spécifiques du polysaccharide capsulaire pneumococcique CPS et du complément, suivie de la phagocytose Le système phagocytaire chez les personnes infectées par le VIH a fait l’objet de recherches approfondies apnée du sommeil. plusieurs défauts fonctionnels dans les cellules phagocytaires chez ces personnes ont été rapportés Les mécanismes de l’impa Cependant, nous émettons l’hypothèse qu’une défense déficiente de l’hôte contre l’infection pneumococcique invasive pourrait être attribuée à une diminution de la réponse IgG spécifique de type ou à une diminution de l’activité opsonique des IgG spécifiques de type chez les patients infectés par le VIH. le sérum circulant de sujets infectés par le VIH Pour approfondir cette hypothèse, nous avons examiné les taux d’IgG spécifiques de type, ainsi que l’activité opsonique contre S pneumoniae, dans des échantillons sériques d’adultes infectés par le VIH. activité contre S pneumoniae, malgré une augmentation des taux d’IgG spécifiques du type, chez les adultes ougandais infectés par le VIH

Méthodes

Les mesures des IgG totaux et des IgG totaux spécifiques du sérotype IgG dans le sérum ont été mesurées par néphélémétrie laser en utilisant des IgG humaines purifiées et des anticorps de chèvre contre IgG Cappel humain. Parmi les souches, les souches de type et les souches de type ont été identifiées, les données non publiées des auteurs Nous avons donc décidé de déterminer les niveaux d’IgG spécifiques au type de type et de type CPS, car ce sont les sérotypes des souches de pneumocoques isolés. sérotypes majeurs par ELISA, selon une méthode rapportée ailleurs Des plaques de microtitration à fond plat de 96 puits ont été recouvertes de tampon bicarbonate de type CPS ~g / mL ou de type CPS ~g / mL et incubées pendant la nuit à ° C Twofold sérum préabsorbé en série dilué avec du polysaccharide de paroi cellulaire CWPS; Statens Serum Institute, Copenhague, Danemark a été ajouté aux plaques recouvertes d’antigène, et les plaques ont été incubées pendant min à température ambiante Après que les plaques ont été lavées, IgG anti-humaine IgG conjugué à la phosphatase alcaline, dilué:, a été ajouté à chaque puits, et les plaques ont été incubées pendant min à température ambiante. La réaction a été développée par p-nitrophényl phosphate Sigma Chemicals, et la densité optique à nm a été lue Les titres de point final ont été exprimés comme le log réciproque de la dilution finale, donnant une densité optique à nm de & gt; pour le type CPS et & gt; Test CL de type CPSChemiluminescence et test de destruction opsonophagocytaire Le CL renforcé au luminol a été mesuré comme décrit ailleurs Les sérotypes S pneumoniae souche P- et souche P-, tous deux isolés de patients ougandais avec CAP, ont été utilisés pour cet essai Les PMNL de leucocytes polynucléaires humains ont été isolés du sang périphérique d’un volontaire sain non infecté par le VIH et mis en suspension dans du tampon de solution saline équilibrée de Hanks avec Ca et Mg HBSS Complément de lapin Baby Cedarlane Laboratories a été utilisé comme source de complément Les mélanges réactionnels contenaient des PMNL humaines × cellules, suspension bactérienne × cfu , mg de luminol-amino-, -dihydro-, – phthallazinedione; Sigma, ~ L de complément, et ~ L de sérum de test inactivé par la chaleur ou de sérum de contrôle immunitaire inactivé par la chaleur CS dans un volume total de ~ L de HBSS contenant% de gélatine Après avoir laissé les mélanges réactionnels s’équilibrer à ° C pendant min. , la suspension bactérienne, le complément, et sérum de test inactivé par la chaleur ou le CS ont été ajoutés pour activer le système L’émission de lumière a été enregistrée en continu pendant min avec un luminomètre Biolumat LB à canal BertholdLe test de phagocytose pour la mort de type S pneumoniae par l’homme Les PMNL ont été simultanément réalisées de la même manière que le CL, en utilisant% gélose au sang de lapin, comme décrit ailleurs Le pourcentage de survie moyenne ± SD des tests a été calculé comme suit: charge bactérienne après incubation / charge bactérienne avant incubation × la destruction bactérienne a été trouvée dans des échantillons contenant des PMNL seuls% ±%, PMNLs et CS% ±%, ou PMNL et complément% ±% En revanche, un niveau significatif d’abattage bactérien était trouvé dans des échantillons contenant PMNL, CS et complément% ±% La réponse CL a atteint un pic et l’émission lumineuse a atteint × cpm dans des échantillons contenant des PMNL, CS et du complément à min après l’incubation. PMNLs et CS × cpm, PMNLs et complement × cpm, et PMNLs seuls × cpm au min après incubation Ces résultats indiquent qu’il existe une corrélation entre la destruction opsonophagocytaire et la réponse au CL renforcée par le luminol Nous avons donc utilisé le rapport CL le rapport de la valeur CL maximale en présence de sérum à la valeur CL maximale en présence de CS pour évaluer l ‘activité opsonique sérique En raison du volume limité de sérum stocké, des échantillons de sujets asymptomatiques infectés par le VIH et des échantillons de sujets asymptomatiques non infectés par le VIH. n’étaient pas disponibles pour tester l’activité opsonique contre les souches de type Analyse statistique La version du logiciel statistique StatView et la version du logiciel SPSS ont été utilisées pour l’analyse des données Toutes les données ont été exprimées en moyenne ± écart-type IgG sériques, niveaux sériques d’IgG à CPS et l’activité opsonique sérique a été comparée entre les groupes en utilisant le test t de Student non apparié ou le test U de Mann-Whitney. La numération des lymphocytes CD CD, les taux d’IgG sériques et la destruction bactérienne dans l’essai opsonophagocytaire ont été analysés par analyse de variance et par des méthodes de comparaison multiple, y compris les tests de Bonferroni-Dunn et Scheffé. Les patients atteints de CAP et de sujets asymptomatiques avec ou sans infection par le VIH ont été analysés par le test de Kruskal-Wallis et la comparaison multiple de Turquie. La signification des corrélations a été estimée à l’aide de la corrélation de rang de Spearman.

Résultats

IgG totales et IgG spécifiques de type Les caractéristiques cliniques et biologiques des sujets infectés par le VIH et non infectés par le VIH sont présentées dans le tableau. Parmi les patients infectés par le VIH avec CAP, les patients ont été infectés par S pneumoniae, alors qu’aucune pneumonie pneumococcique n’a été trouvé chez les patients non infectés par le VIH avec CAP La numération des lymphocytes CD du sang périphérique des patients avec CAP était significativement plus faible que celle des sujets asymptomatiques dans le groupe non infecté par le VIH P = et dans le groupe infecté par le VIH P & lt; Une diminution du nombre de lymphocytes CD a toutefois été observée chez les patients atteints de PAC pendant la phase aiguë, quel que soit le statut VIH Le taux sérique total d’IgG chez les sujets infectés par le VIH était supérieur à celui des sujets non infectés par le VIH. mL; P & lt; , qui confirme les rapports précédents d’activation des cellules B chez ces individus Aucune différence significative n’a toutefois été trouvée dans les taux totaux d’IgG sériques entre les patients atteints de CAP et les sujets asymptomatiques, quel que soit le tableau sérologique VIH. les souches sériques étaient significativement plus élevées chez les sujets infectés par le VIH que chez les sujets non infectés par le VIH ± vs ± pour le type et ± vs ± pour le type; P & lt; , pour l’un ou l’autre type; les niveaux totaux d’IgG sériques étaient significativement corrélés avec les taux d’IgG sériques de type CPS r =; P & lt; et tapez CPS r =; P & lt; parmi les sujets infectés par le VIH

Tableau View largeDownload slide Caractéristiques cliniques et données de laboratoire pour les sujets atteints de pneumonie acquise en communauté et les sujets AS asymptomatiques en OugandaTable View largeTélécharger les lamesCaractéristiques cliniques et données de laboratoire pour les sujets atteints de pneumonie communautaire CAP et sujets AS asymptomatiques en OugandaOpéralité opsonique L’activité opsonique dans le sérum les échantillons provenant de sujets infectés par le VIH et dont les titres d ‘IgG spécifiques à la souche type étaient significativement plus élevés que ceux des sujets infectés par le VIH et dont les titres d’ IgG spécifiques à un type de. P & lt; L ‘activité opsonique dans les échantillons sériques de sujets infectés par le VIH avec des titres d’ IgG spécifiques de type pour la souche type était également significativement plus élevée que dans les échantillons sériques de sujets infectés par le VIH avec des titres d ‘IgG et P & lt; En revanche, aucune différence significative n’a été trouvée dans l’activité opsonique contre la souche type dans le sérum des sujets non infectés par le VIH avec différents titres d’IgG spécifiques du type P =, par le test de Kruskal-Wallis De même, aucune différence significative dans l’activité opsonique la souche a été trouvée dans le sérum de sujets non infectés par le VIH avec différents titres d’IgG spécifiques du type P =

Tableau View largeTélécharger slideComparaisons de l’activité opsonique contre le type et le type Streptococcus pneumoniae dans des échantillons de sérum contenant différents niveaux d’IgG spécifiques de sujets de sujets infectés par le VIH en OugandaTable View largeTélécharger slideComparaisons de l’activité opsonique contre le type et le type Streptococcus pneumoniae dans des échantillons sériques contenant différents niveaux Il est intéressant de noter qu’une corrélation significative entre la numération lymphocytaire CD périphérique et l’activité opsonique sérique contre la souche type a été trouvée chez des sujets asymptomatiques infectés par le VIH, comme le montre la figure A r = ; P = Une relation similaire entre ces paramètres a été trouvée pour la souche de type, bien que la corrélation ne soit pas statistiquement significative. P = Parce qu’une corrélation inverse entre les numérations lymphocytaires CD et les concentrations plasmatiques d’ARN-VIH a déjà été démontrée chez des adultes ougandais asymptomatiques infectés par le VIH , nous avons comparé l’activité opsonique sérique et la charge virale plasmatique chez ces sujets. entre la charge virale plasmatique et l’activité opsonique sérique contre la figure de contrainte type C; r = -; P = et la figure de contrainte de type D; r = -; P =

Figure Vue largeDownload slideCorrelation entre le nombre de lymphocytes CD sanguins et l’activité opsonique sérique contre Streptococcus pneumoniae de type A et B et corrélation entre la charge plasmatique d’ARN VIH et l’activité opsonique sérique contre les souches de type C et D chez les adultes ougandais infectés par le VIHFigure Voir grandTélécharger www.cnrs.fr www.inist.fr Lancer la recherche Corrélation entre la numération lymphocytaire CD et l ‘activité opsonique sérique contre Streptococcus pneumoniae de type A et B et corrélation entre la charge plasmatique d’ ARN VIH et l ‘activité opsonique sérique chez des adultes ougandais infectés par le VIH. PAC avec ou sans infection par le VIH Une diminution significative de l’activité opsonique sérique contre la souche type a été observée chez les sujets infectés par le VIH, par rapport aux sujets non infectés par le VIH ± vs ±; P & lt; En revanche, les niveaux d’activité opsonique sérique contre la souche type étaient légèrement plus faibles chez les sujets infectés par le VIH que chez les sujets non infectés par le VIH ± vs ±; P =, bien que la différence ne soit pas statistiquement significative En outre, une diminution significative de l ‘activité opsonique sérique contre la souche type a été observée chez les patients infectés par le VIH avec CAP, comparée aux niveaux d’ activité des sujets asymptomatiques infectés par le VIH. Figure A L’activité opsonique sérique contre la souche type pour les patients infectés par le VIH avec CAP était également significativement plus faible que celle pour les sujets infectés par le VIH asymptomatiques figure D, bien qu’il n’y ait pas eu de différence significative entre les deux groupes. Aucune différence significative n’a été observée dans l’activité opsonique sérique contre les souches de type et de type et dans les taux sériques d’IgG de type et de type CPS entre les patients non infectés par le VIH avec CAP et sujets asymptomatiques non infectés par le VIH, figures C et D

Figure Vue largeDownload slide Comparaison des niveaux d’IgG sériques pour typer polysaccharide capsulaire pneumococcique CPS A et type CPS B et l’activité opsonique sérique contre le type C et Streptococcus pneumoniae type D chez les patients atteints de pneumonie communautaire acquise PAC et les sujets asymptomatiques AS avec le VIH ou sans VIH- Infection par le VIH * P & lt; ; ** P & lt; ; *** P & lt; Comparaison des niveaux d’IgG sériques pour typer le polysaccharide capsulaire pneumococcique CPS A et type CPS B et l’activité opsonique sérique contre le type C et Streptococcus pneumoniae type D chez les patients atteints de pneumonie acquise en communauté CAP et sujets asymptomatiques AS avec le VIH ou sans infection VIH-VIH * P & lt; ; ** P & lt; ; *** P & lt; , par Kruskal-Wallis test avec la comparaison multiple de la Turquie

Discussion

Une augmentation des taux d’IgG spécifiques du sérum chez les sujets infectés par le VIH, par rapport aux taux typiques des sujets non infectés par le VIH, a été trouvée. Une corrélation significative a également été trouvée entre les taux d’IgG spécifiques et les IgG totales dans le sérum du VIH. En revanche, des études antérieures ont rapporté que les taux sériques d’IgG à CPS chez les sujets infectés par le VIH étaient significativement plus faibles que chez les sujets non infectés par le VIH ou qu’il n’y avait pas de différence entre les taux d’IgG spécifiques – sujets infectés et non infectés par le VIH Deux études ont récemment rapporté que l’avidité des IgG spécifiques de type affecte à la fois l’activité opsonique in vitro et l’activité protectrice in vivo et que cette réponse est critique dans l’infection pneumococcique ont été largement confinés à des sujets non infectés par le VIH Dans la présente étude, des échantillons de sérum de sujets infectés par le VIH qui contenaient des titres de titres d’IgG spécifiques de type inférieur pour le type et – pour le type avaient des niveaux plus élevés d’activité opsonique contre le tableau des souches type et type. Ces données, associées à l’observation de taux sériques accrus d’IgG spécifiques de type chez les sujets infectés par le VIH et sensibles à une infection pneumococcique invasive, peuvent suggérer que ces sujets ont des anomalies fonctionnelles des IgG spécifiques de type Nous avons donc examiné l’avidité des IgG spécifiques de type dans un nombre limité d’échantillons sériques d’adultes ougandais infectés par le VIH et non infectés par le VIH, en utilisant une méthode basée sur la dissociation de l’antigène anticorps. complexes en présence de thiocyanate de sodium mol / L Une corrélation significative entre les paramètres a été trouvée dans un groupe de sujets asymptomatiques non infectés par le VIH r =; P =, ce qui est cohérent avec les rapports publiés ailleurs En revanche, aucune corrélation n’a été trouvée entre les niveaux d’avidité des IgG spécifiques de type et l’activité opsonique dans un groupe de sujets asymptomatiques infectés par le VIH r =; Intéressant, nous avons trouvé une corrélation significative entre le nombre de lymphocytes CD du sang périphérique et l’activité opsonique sérique contre la souche type chez les sujets infectés par le VIH. Une relation similaire a été trouvée entre les numérations lymphocytaires CD et l ‘activité opsonique sérique contre la souche type chez les sujets infectés par le VIH. Figure B En outre, la charge VIH était corrélée inversement à l’ activité opsonique sérique chez les sujets asymptomatiques infectés par le VIH. Les données suggèrent que le VIH lui-même peut inhiber l’activité opsonique sérique contre S pneumoniae. L’interférence du VIH avec les IgG spécifiques du type et le complément nécessitera donc une étude plus approfondie. avec CAP, comparé aux sujets asymptomatiques infectés par le VIH, figures C et D Une augmentation de la charge virale pourrait supprimer l’activité opsonique dans le sérum des patients atteints de CAP infectés par le VIH au moment de l’admission. Ces données corroborent fortement les résultats antérieurs. cela indique que le risque de pneumonie bactérienne est le plus élevé chez les sujets infectés par le VIH avec un nombre de lymphocytes CD de & lt; cellules / L dans les pays africains, ainsi que dans les pays industrialisés , et démontrent une nouvelle découverte, qu’un défaut d’immunité est un mécanisme dans les infections pneumococciques invasives chez ces sujets. Une étude récente a rapporté que l’utilisation de la double absorption améliore la corrélation. Cependant, les exceptions notables étaient le type et le type de CPS, dans lesquels la double absorption a eu un effet minime sur les concentrations d’anticorps. Nous avons donc examiné si la double absorption pouvait entraîner une amélioration de la concentration d’anticorps. Nous avons trouvé que l ‘absorption des anticorps à réactivité croisée avec CWPS et F CPS n’avait aucun effet sur l’ activité opsonique contre la souche type, comparé à l ‘absorption par CWPS seul. En conclusion, nous rapportons des niveaux diminués d’activité opsonique sérique contre S pneumoniae, malgré des niveaux accrus Chez les adultes ougandais infectés par le VIH, les charges plasmatiques du VIH étaient corrélées inversement avec les niveaux d’activité opsonique, tandis que les numérations lymphocytaires du CD périphérique avaient tendance à être directement corrélées avec l’activité opsonique sérique, contre les souches type et type de S Ces données suggèrent que l ‘activité opsonique sérique défectueuse joue un rôle important dans les infections pneumococciques invasives chez les adultes africains infectés par le VIH. Des investigations supplémentaires seront nécessaires pour clarifier les anomalies fonctionnelles spécifiques des IgG spécifiques du type dans le sérum de. Adultes africains infectés par le VIH

Reconnaissance

Nous remercions Philip Ombasi pour son support technique

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